文献类型：期刊文章

作　　者：刘诗琴[1] 黄建芳[1] 谈思怡[1] 邵晨晨[1] 向军俭[1]

机构地区：[1]暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室,广州510632

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：广东省战略新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800007);广东省产学研项目(2010B090400426)

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：5

起止页码：441-445

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的获得人脑钠肽前体N端(NT-pro BNP)的高亲和力、高特异性的抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测人血浆中NT-pro BNP。方法通过Discovery Studio4.0软件预测抗原表位,合成其表位肽偶联载体蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术获得分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗。通过SDS-PAGE、ELISA等方法对获得的抗体性质进行鉴定,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,并对120例临床血液样本中NT-pro BNP进行快速检测。结果获得6株能稳定分泌抗人NT-Pro BNP抗体的杂交瘤细胞株,其中4株单抗的腹水型效价高于1×10^(-6)。共筛选出4对能双抗夹心ELISA配对的抗体,其中Ab1与Ab5具有较高的灵敏度和较大的线性范围,其亲和力分别为1.0×10^(10)L/mol与5.9×109L/mol,检测线性范围:300~9 600 pg/ml。样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为97.5%(78/80),阴性检出率为100%(40/40)。结论筛选获得1对高亲和力、高特异性的配对抗体,建立了双抗体夹心ELISA的检测方法,亦为新的快速免疫学检测方法的建立奠定了基础。

关 键 词：人N末端B型脑钠肽前体(NT-pro  BNP)  单克隆抗体  双抗体夹心ELISA

分 类 号：R392-33]