文献类型：期刊文章

作　　者：贺鹏[1] 段莉[2] 梁宇杰[3]

机构地区：[1]南方医科大学附属深圳恒生医院口腔科,广东深圳518102 [2]广东省深圳市第二人民医院中心实验室、深圳市组织工程重点实验室,518035 [3]北京大学深圳研究生院化学生物学与生物技术学院,广东深圳518055

出　　处：《广东医学》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81260161,81000460);广东省深圳市科创委基础研究项目(编号:JCYJ20140414170821160);广东省深圳市科技计划项目(编号:201003462)

年　　份：2016

卷　　号：37

期　　号：7

起止页码：970-973

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建一种抑制microRNA-140(miR-140)表达的腺相关病毒(AAV)载体系统,从而实现对细胞内miR-140表达水平的高效抑制。方法应用分子生物学方法将腺相关病毒载体与miRNA诱饵microRNA tough decoy RNAs(Tu D)相结合,构建p AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP表达质粒;用脂质体转染法将p AAVU6-miR-140-Tu D-EGFP表达质粒和p AAV-RC、p AAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装生成携带miR-140-Tu D的重组腺相关病毒r AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP。进一步将病毒感染骨肉瘤细胞U2OS,定量RT-PCR检测miR-140-Tu D对细胞内miR-140基因的沉默效果,并测定病毒的感染滴度。结果DNA测序证明miR-140-Tu D已成功构建到表达质粒p AAV-U6-MCS-EGFP中;AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白提示共转染成功;r AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP感染滴度约为4.1×1010·m L-1;包装的重组腺相关病毒r AAV-U6-miR-140-Tu D-EGFP感染U2OS细胞后,能显著下调U2OS细胞miR-140基因的表达水平。结论携带miR-140-Tu D重组腺相关病毒的包装成功,该病毒具有稳定沉默miR-140基因从而降低其表达水平的功能。

关 键 词：腺相关病毒 miR-140  TOUGH DECOY 骨肉瘤细胞

分 类 号：R394]