文献类型：期刊文章

作　　者：王振良[1] 丁然然[1] 哈艳平[1] 雷洪[1] 王可可[1] 申志华[2] 姜汉国[1] 揭伟[1]

机构地区：[1]广东医科大学病理学系,湛江524023 [2]广东医科大学基础医学院病理生理学教研室,湛江524023

出　　处：《临床与实验病理学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(81170121;81541004);广东医学院优硕培育基金(YS2014013;YS2015004;YS2015005)

年　　份：2016

卷　　号：32

期　　号：4

起止页码：416-420

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 构建低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法 从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1mRNA水平的变化。结果 成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×108TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1mRNA的水平。结论 心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。

关 键 词：质粒构建 慢病毒包装  心肌细胞  NOTCH信号 低氧诱导因子1Α

分 类 号：R363]