文献类型：期刊文章

作　　者：蔡怡[1] 周前进[1] 顾建锋[2] 陈先锋[1,2] 陈炯[1]

机构地区：[1]宁波大学生物与海洋科学系,宁波315211 [2]宁波检验检疫科学技术研究院,宁波315012

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家科技支撑计划项目(No.2012BAK11B03);浙江省自然科学基金项目(No.LY14C180002);宁波市科技创新团队(No.2015C110018);宁波大学2015年度研究生科研创新基金(No.G15065)

年　　份：2016

卷　　号：24

期　　号：5

起止页码：770-780

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了提高检测效率,本研究利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)扩增核酸,用横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)检测产物,建立了一种山茶根结线虫(Meloidogyne camelliae)的LAMP-LFD快速检测新技术。以山茶根结线虫核糖体DNA内转录间隔区(ribosomal DNA-internal transcribed spacer,r DNA-ITS)为检测靶标,设计3对特异性引物进行生物素标记的实时荧光LAMP反应,优化后的LAMP扩增条件为63℃反应15 min。比较LFD、实时荧光曲线以及琼脂糖凝胶电泳等3种产物检测方法,结果表明,LAMP产物与异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针ITS-HP杂交5 min后即可在LFD上显色,从LAMP反应开始到LFD结果判断仅需25min,比常规PCR技术缩短约2 h。LAMP-LFD技术能特异性地检测山茶根结线虫,对其基因组DNA的检测灵敏度为4 pg/μL,低于常规PCR方法100倍;对其单条2龄幼虫(J2)检测灵敏度为1/1 000条线虫。本研究建立的快速、灵敏、特异性LAMP-LFD检测技术可应用于山茶根结线虫的口岸检验。

关 键 词：山茶根结线虫  环介导等温扩增(LAMP)  横向流动试纸条(LFD)  检测  

分 类 号：S432.45]