文献类型：期刊文章

作　　者：易德武[1] 张俊波[2] 王远志[3] 李默[3] 李爽[1] 张欢[1] 王杰[3] 陈创夫[1]

机构地区：[1]石河子大学动物科技学院/新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,新疆石河子832003 [2]铜仁学院生物与农林工程学院,贵州铜仁554300 [3]石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室,新疆石河子832002

出　　处：《石河子大学学报（自然科学版）》

基　　金：国际科技合作项目(2013DFA32380);国家大学生SRP项目(201510759063)

年　　份：2016

卷　　号：34

期　　号：1

起止页码：24-29

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：为了构建布鲁氏菌015 sodc基因缺失株,本研究采用PCR方法以热灭活的羊种布鲁氏菌新疆流行株015为模板,分别扩增sodc基因的上下游同源臂序列;以枯草芽孢杆菌为模板,扩增Sac B基因,将扩增序列分别连至克隆载体p MD19-T simple上并测序,然后在双酶切后将上下游同源臂序列连接至自杀载体p GEM-7Zf+上,分别得到了p GEM-7zf-Δsodc,再将Sac B基因单酶切后连接至上述载体上,构建成同源重组自杀质粒pss。经8%蔗糖平板筛选鉴定Sac B基因的活性。将构建好的自杀质粒分别电转化至布鲁氏菌015感受态细胞中,通过氨苄抗性筛选和8%蔗糖敏感筛选后获得了015Δsodc基因缺失株。对获得的基因缺失株进行PCR鉴定和遗传稳定性检测。通过检测侵染小鼠巨噬细胞cfu、缺失株免疫小鼠后体内Ig G,IFN-γ的水平,及脾脏cfu,对其毒力进行了初步评价。结果表明,该缺失株20代内未发生回复性突变,成功构建了具有非抗性基因标记的缺失株,并且015Δsodc细胞cfu、脾脏cfu,及IFN-γ的水平都显著低与亲本株015,说明毒力与亲本株相比有一定程度的下降。本研究可为今后布鲁氏菌致病机理及新疫苗的研究提供实验材料。

关 键 词：布鲁氏菌 sodc基因  缺失株  

分 类 号：S432.412]