文献类型：期刊文章

作　　者：卢帅[1] 蓝佳明[2] 陈迎珠[1] 周剑芳[2] 秦堃[2] 楼永良[1] 谭文杰[2]

机构地区：[1]温州医科大学检验医学院、生命科学学院,医学病毒学研究所,325035 [2]中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,卫生和计划生育委员会医学病毒学与病毒病重点实验室,北京102206

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

年　　份：2016

卷　　号：36

期　　号：2

起止页码：98-102

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的对中东呼吸综合征冠状病毒（MERS—CoV）刺突蛋白受体结合区（RBD）蛋白进行原核表达、纯化与鉴定及抗原性初步研究。方法人工合成密码子优化的MERS—CoVRBD编码基因，克隆至pET30a（＋）载体，构建重组表达质粒，转化至BL21（DE3）。利用IPTG诱导，探索优化表达条件，并用镍离子亲和层析纯化，SDS—PAGE和Westernblot进行鉴定，并采用间接ELISA对原核表达的RBD进行抗原活性和特异性初步分析。结果重组RBD蛋白主要以包涵体形式表达，以37℃0．5mmol／LIFFG诱导4h表达量最高；变性复性后纯化获得了较纯的重组RBD蛋白，相对分子质量大小约为29×10^3，与预期一致；Westernblot表明其能与感染MERS—CoV的小鼠血清发生特异性反应；间接ELISA显示原核表达RBD蛋白在检测正常和MERS—CoV感染患者血清方面表现出较好的抗原活性和特异性。结论本研究首次利用原核表达系统成功表达并纯化获得重组MERS—CoVRBD蛋白，为MERS—CoV的免疫学检测及疫苗学研究提供了基础。

关 键 词：中东呼吸综合征  冠状病毒 受体结合区  原核表达 纯化 鉴定  

分 类 号：Q78] R373]