文献类型：期刊文章

作　　者：张敏[1] 刘裕禄[2] 张春[2] 熊敏[2] 刘建社[2] 姜华军[2]

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属荆州医院肾内科,荆州434020 [2]华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科,武汉430022

出　　处：《华中科技大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30900682)

年　　份：2016

卷　　号：45

期　　号：1

起止页码：27-32

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2015_2016、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的消除免疫沉淀技术中免疫印迹检测到的非特异性条带,排除非特异性条带对研究蛋白质分子相互作用及磷酸化的干扰。方法检测蛋白交联剂庚二亚氨酸二甲酯(DMP)交联抗体和载体基质的稳定性及交联效果;积极寻找和优化抗原析出条件,分离出免疫沉淀复合物中抗原成分;检测析出抗原特异性条带及磷酸化水平。结果 DMP有效地将抗体共价结合于载体基质,具有较好的稳定性和交联效果,其免疫沉淀中未检测到非特异性蛋白条带;与Laemmli缓冲液相比,甘氨酸可有效地一次性析出免疫沉淀中大部分抗原;经pH值调整后,析出抗原的浓度及磷酸化水平无明显变化。结论交联剂DMP能有效地消除传统免疫沉淀技术中检测到的非特异性蛋白条带,且能应用于蛋白质磷酸化的检测。

关 键 词：免疫沉淀 蛋白质相互作用 蛋白质磷酸化

分 类 号：R392]