文献类型：期刊文章

作　　者：伊静[1,2] 李靖[1,2] 王璇[1,2] 蓝茜[1,2] 李玥[1,2] 刘莉[1,2] 梁栋[1,2] 杜小娟[1,2] 武丽涛[1,2] 闫小飞[1,2] 杨旭东[1,2] 张富军[1,2] 李冬民[1,2]

机构地区：[1]西安交通大学医学部遗传学与分子生物学系,陕西西安710061 [2]西安交通大学医学部环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安710061

出　　处：《国外医学（医学地理分册）》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.81370952;8137013);陕西省科技计资助划项目(No.2013K21-22-03)

年　　份：2015

卷　　号：36

期　　号：4

起止页码：274-277

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、UPD、普通刊

摘　　要：目的构建并鉴定大鼠转录因子Smad2的高表达载体(简称pLJM1-Smad2)。方法首先以E3大鼠肝脏cDNA为模板、PCR法获取转录因子Smad2 mRNA CDS区(即目的基因片段);然后用Age I、EcoR I双酶切pLJM1-MGFP载体和目的基因片段,用T4DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;之后再将连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,扩大培养并提取重组质粒;最后用PCR、Age I和EcoR I双酶切以及DNA测序鉴定重组质粒。结果 PCR、Age I和EcoR I双酶切结果均提示pLJM1-Smad2重组载体中插入了目的片段Smad2;将含有目的片段的阳性重组体克隆送上海生工进行DNA测序,并将测序结果与NCBI数据库的进行比对,确定插入片段无突变、序列完全正确,证实pLJM1-Smad2重组载体中成功插入了目的基因片段Smad2。结论成功构建了转录因子Smad2的高表达载体pLJM1-Smad2。

关 键 词：转录因子Smad2  高表达载体  目的片段  重组载体  

分 类 号：R575.5]