文献类型：期刊文章

作　　者：金小花[1] 秦高[2]

机构地区：[1]苏州农业职业技术学院食品科学系化学与生物技术教研室,苏州215008 [2]上海诺百生物科技有限公司,上海200233

出　　处：《中国生化药物杂志》

年　　份：2015

卷　　号：35

期　　号：9

起止页码：51-53

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、CSA-PROQEUST、IC、RCCSE、普通刊

摘　　要：目的探究慢病毒介导RNAi沉默SGMS2基因的单克隆细胞系构建中最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)及BSD基因筛选抗生素(blasticidin)浓度。方法荧光标记小鼠SGMS2干扰阴性对照慢病毒并按照MOI值0、10、30、60、120(TU number/cell)分别侵染INS-1空白细胞,培养72 h后使用荧光显微镜拍照并计算细胞的荧光比率(%)及死亡率(%),以确定最佳MOI值。小鼠胰岛素瘤INS-1空白细胞中加入0、1、2、3μg/m L blasticidin,第7天时采用MTT法检测细胞的死亡率,以确定细胞抗生素敏感浓度。使用SGMS2干扰阴性对照慢病毒及SGMS2干扰慢病毒(病毒滴度:1×108TU/m L)按照最佳MOI值侵染细胞,并用blasticidin敏感浓度进行阳性细胞筛选,获得混合系细胞。当细胞的荧光率达90%时,进行单克隆稳转细胞系的构建。结果最佳MOI值为60,此时细胞的荧光率达100%,但细胞的死亡率<0.5%,细胞保持原有的形态。当blasticidin敏感浓度为2μg/m L,此时空白细胞失去原有的贴壁性,全部死亡。INS-1-SEMS2细胞第2次检测的Ct值28.21大于第1次检测的Ct值27.58,且siRNA的干扰效率为77.78%,siRNA成功表达,混合稳转细胞系构建成功。成功构建小鼠胰岛素瘤INS-1-SEMS2单克隆细胞系。结论慢病毒介导RNAi沉默基因SGMS2的单克隆细胞系构建成功。

关 键 词：小鼠胰岛素瘤INS-1细胞  感染复数  BSD基因筛选抗生素  细胞稳转株  

分 类 号：Q78]