文献类型：期刊文章

作　　者：范洋洋[1,2] 陈晨[1,2] 王欣[1,2] 宋菲[1,2] 唐顺明[1,2] 易咏竹[1,2] 沈兴家[1,2]

机构地区：[1]江苏科技大学生物技术学院,江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室,江苏镇江212018 [2]中国农业科学院蚕业研究所,农业部蚕桑遗传改良重点实验室,江苏镇江212018

出　　处：《蚕业科学》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31172266);江苏省研究生培养创新工程项目(No.CXZZ12-0726)

年　　份：2015

卷　　号：41

期　　号：5

起止页码：847-853

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD_E2015_2016、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因（BmFib-L）和P25蛋白基因（BmP25）有潜在调控作用的Bmo-miR-2755＊。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755＊及其靶基因BmFib-L、BmP25在家蚕4~5龄期幼虫后部丝腺和5龄3 d幼虫不同组织器官中的表达水平,结果显示三者在后部丝腺组织中的表达水平都较高,呈现严格的时空特异性。以pcDNA3质粒为载体,构建Bmo-miR-2755＊的重组表达载体pcDNA3[ie1-egfpprimiR-2755＊-SV40];以pGL3.0-Basic质粒为载体,分别构建BmFib-L 3＇UTR、BmP25 3＇UTR与荧光素酶报告基因luc融合的重组报告质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3＇UTR-SV40]和pGL3.0[A3-luc-P25-3＇UTR-SV40]。以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,分别将构建的Bmo-miR-2755＊重组表达载体和2个重组报告质粒共转染BmN细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,明确Bmo-miR-2755＊可显著下调BmFib-L基因的表达,并能上调BmP25基因的表达,但上调作用未达显著水平。上述结果为研究家蚕miRNA的功能和阐明蚕丝蛋白基因表达调控分子机制提供了新的实验数据。

关 键 词：miRNA  家蚕 Bmo-miR-2755＊  丝素轻链基因  P25基因  表达调控  

分 类 号：Q78] S881.2]