文献类型：期刊文章

作　　者：方佳萍[1,2] 赵秀娟[3] 齐艳[4] 王玺[3] 吴旭东[3] 娄建石[1]

机构地区：[1]天津医科大学基础医学院药理学教研室,300070 [2]天津市和平区小白楼街社区卫生服务中心 [3]天津医科大学基础医学院细胞生物学系 [4]天津医科大学眼科医院

出　　处：《天津医药》

基　　金：973国家重点基础研究发展计划--组蛋白甲基化酶调控NK细胞功能的机制与结构研究(2014CB910104);天津市高等学校科技发展基金计划项目(093-201301)

年　　份：2015

卷　　号：43

期　　号：10

起止页码：1104-1107

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAB、CAS、IC、JST、PUBMED、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的利用CRISPR/Cas9n系统在NIH3T3小鼠胚胎成纤维细胞系中敲除Asxl2基因。方法设计一对靶向小鼠Asxl2基因第5个外显子的小向导RNA(sg RNA),分别克隆进p X462载体。将测序鉴定正确的重组质粒转染至NIH3T3细胞中,利用有限稀释法得到单细胞,通过培养获得单克隆细胞系。提取单克隆细胞系基因组DNA,ge-notyping PCR扩增出靶位点附近的DNA片段并测序。利用Western blot方法检测细胞株中Asxl2的敲除效果。结果成功构建靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒。将2个重组质粒共转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选后得到亚克隆细胞系,并且经genotyping PCR测序验证得到一株正确的单克隆细胞系。Western blot证实敲除Asxl2后,该NIH3T3细胞系中Asxl2蛋白表达缺失。结论通过这个系统得到了靶向Asxl2的CRISPR/Cas9n重组质粒及稳定敲除Asxl2的NIH3T3细胞系。

关 键 词：ASXL2  CRISPR/Cas9n  CRISPR系统  表观遗传

分 类 号：R349.5[基础医学类]