文献类型：期刊文章

作　　者：王立正[1] 王子璇[1] 朱瑞[1] 刘镇天[1] 于彬[1] 于湘晖[1] 赵兴红[1]

机构地区：[1]吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室,长春130012

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(31300756;81472816);吉林省科技发展计划青年科研基金项目(20140520007JH)资助

年　　份：2015

卷　　号：31

期　　号：9

起止页码：1221-1224

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:获得具有活性的脑多巴胺能神经营养因子(CDNF)蛋白并制备CDNF多克隆抗体。方法:选用VR1012作为真核表达载体,在HEK293T细胞中表达带有his标签的CDNF蛋白,镍柱亲和层析进行纯化,SDS-PAGE检测纯化情况,Western blot鉴定蛋白的正确性,MTT检测CDNF蛋白对PC12细胞的保护活性。免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果:构建的p VR1012-CDNF-his在HEK 293T细胞中高效分泌表达,镍柱亲和层析获得纯度90%以上的CDNF蛋白,MTT结果显示纯化获得的蛋白具有对PC12细胞的保护作用。免疫动物后,成功制备出CDNF多克隆抗体。结论:通过HEK293T细胞中表达-镍柱亲和层析获得具有纯度较高且具有生物活性的CDNF蛋白,并成功制备多克隆抗体以方便后续对于CDNF应用及相关机制的研究。

关 键 词：CDNF  多克隆抗体 镍柱亲和层析  帕金森病

分 类 号：R392.33]