文献类型：期刊文章

作　　者：张岩[1] 张朝辉[1] 刘冬忍[1] 王小飞[1] 王景冒[1] 邱立友[1]

机构地区：[1]河南农业大学生命科学学院/农业部农业微生物酶工程重点实验室,郑州450002

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：河南省教育厅重点项目(No.13A180483)

年　　份：2015

卷　　号：23

期　　号：8

起止页码：1112-1120

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：本研究旨在建立一种高效的双孢蘑菇（Agaricus bisporus）遗传转化方法,并以此方法构建双孢蘑菇1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因（1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase,ACO）的RNAi突变株,研究该基因的功能,探索双孢蘑菇的乙烯生物合成途径。将脂质体和构建的双孢蘑菇ACO部分编码区序列的双链RNA表达质粒p BHg-ds ACO按1μL∶2.5μg混匀后稀释1 000倍,与幼嫩双孢蘑菇子实体的菌褶组织细块（长约4 mm）在室温下共培养100 min,然后在再生培养基（regeneration complete medium,RCM）平板中25℃培养7 d左右,挑取萌发的组织块移植于含潮霉素的PDA平板中进行筛选和继代培养,再经PCR鉴定获得转化子。结果表明,构建的双孢蘑菇ACO基因RNAi转化子遗传稳定,ACO基因表达量比出发菌株降低47%~74%（P〈0.01）,ACO酶活力和乙烯产量分别降低68%~86%和27%~48%（P〈0.05）,表明双孢蘑菇具有和高等植物相同的合成乙烯的ACC途径。本研究结果提示,脂质体介导转化双孢蘑菇菌褶方法简便高效,为双孢蘑菇的遗传改良提供了新的高效分子生物学手段。

关 键 词：脂质体介导转化  双孢蘑菇 菌褶  RNA干扰(RNAI) 1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶基因(ACO)  

分 类 号：S513.03]