文献类型：期刊文章

作　　者：罗兰芳[1] 余为一[1] 陈芳芳[1]

机构地区：[1]安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,合肥230036

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.31201888;31372417)

年　　份：2015

卷　　号：31

期　　号：7

起止页码：879-883

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:研究鸡Ii与B-L基因表达产物在细胞内定位和互相结合的活性特征。方法:将克隆的Ii、B-LA和B-LB基因片段分别插入原核或真核表达质粒;然后分别单独转染或共转染工程菌Rosetta(DE3)或293T细胞。所有重组菌经鉴定后进行诱导表达后再复性。单一表达产物用免疫印迹检测它们的抗原性,共转染表达的产物用pull-down法和(SDS-)PAGE观察其互相结合特征。结果:成功构建了6个原核和真核表达重组质粒。在真核细胞中Ii、B-LA和B-LB基因表达产物定位于细胞浆膜,而原核表达产物经复性后和亲和层析纯化,获得单一蛋白分子。其次,原核表达的Ii与B-LA和B-LB复性蛋白能够诱导产生鼠源抗体,这些抗体特异性结合真核表达产物,表明它们保持相同的免疫原性。最后,用pull-down从共转染的工程菌表达并复性的蛋白分子中分别获得纯化的Ii/B-LA和Ii/B-LB复合物,它们经SDS处理后分别被解离成单体。结论:鸡Ii和B-L基因的原核与真核表达的产物能够保持其抗原性,而原核共表达的Ii和B-L蛋白分子复性后可以互相结合。本研究的结果为进一步研究Ii与B分子关系提供了方法。

关 键 词：恒定链  B-L  Pull-down  表达  复合物

分 类 号：S852.4]