文献类型：期刊文章

作　　者：林海斌[1] 张娅菲[1] 杨聪莺[1] 罗兰芳[1] 杨磊[1] 余为一[1] 刘洪明[2] 陈芳芳[1]

机构地区：[1]安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室,合肥230036 [2]烟台市动物卫生监督所,烟台264000

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.31201888和No.31172306)

年　　份：2015

卷　　号：23

期　　号：6

起止页码：772-778

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：恒定链(invariant chain,Ii)能结合主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类和Ⅱ类分子,并在MHC递呈抗原中起重要辅助作用。为了探讨鱼类Ii和MHC分子体外结合关系,本研究采用Pull-down方法检测草鱼(Ctenopharyngodon idellus)Ii与MHCⅠ类或Ⅱ类分子的结合。克隆草鱼Ii(711 bp)、MhcⅠα(540 bp)和MhcⅡβ(549 bp)基因片段,再将其分别插入原核表达质粒PET-22b(无His标签)或PET-28a(含His标签)中,构建了3个重组质粒PET-22b-Ii、PET-28a-MhcⅠα和PET-28aMhcⅡβ。然后分别转染工程菌大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),进行诱导表达、纯化和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)鉴定。结果表明,含His标签的MHCⅠα和MHCⅡβ不仅表达,而且可高效纯化,其相对分子质量约为24 k D;Western blot结果表明,Ii可表达,相对分子质量约为30 k D。将PET-22b-Ii与PET-28a-MhcⅠα或PET-28a-MhcⅡβ分别共转染Rosetta(DE3),构建了重组菌Rosetta(DE3)(PET-28a-MhcⅠα+PET-22b-Ii)和Rosetta(DE3)(PET-28a-MhcⅡβ+PET-22b-Ii)。经诱导表达和PAGE检测发现,MHCⅠα和MHCⅡβ分别结合Ii,形成相对分子质量为54 k D的复合物;SDS处理后,分别被解离形成单分子Ii(30 k D)以及MHCⅠα或MHCⅡβ(24 k D)。在Western blot中,解离后的Ii可与特异性多克隆抗体结合并被电化学发光(electrogenerated chemiluminescence,ECL)显色。综上所述,草鱼Ii可以分别与MHCⅡβ和MHCⅠα结合,为进一步研究动物Ii与MHC分子的关系提供了基础资料。

关 键 词：草鱼 恒定链(Ii)  主要组织相容性复合体(MHC)  原核共转染  

分 类 号：S813]