文献类型：期刊文章

作　　者：王保宁[1] 潘兴[1,2] 黄筱钧[1] 周永君[2] 祝捷[2] 高礼珍[2] 牛晓娟[2] 李婉宜[1] 李明远[1] 王红仁[1]

机构地区：[1]四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都610041 [2]四川万可泰生物技术有限责任公司,成都610041

出　　处：《四川大学学报（医学版）》

基　　金：四川省科技厅科技支撑计划项目(No.2014SZ0036)资助

年　　份：2015

卷　　号：46

期　　号：3

起止页码：354-358

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(ureI、ureB)及霍乱毒素B亚单位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选出T细胞和B细胞优势表位,通过柔性Linker相连,并在其N端加入分子内佐剂序列ctB,按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,即为BIB序列。人工合成之后,插入原核表达质粒pET28a(+)中,构建pET28a(+)/ctB-ureI-ureB〔pET28a(+)/BIB〕重组质粒。经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定正确后,将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。BIB工程菌经乳糖诱导表达后,SDS-PAGE检测重组蛋白BIB的表达情况,并对其N端氨基酸序列和相对分子质量进行测定,Western blot对其进行抗原性鉴定。结果原核表达质粒pET28a(+)/BIB经双酶切和测序鉴定构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量33×103处有一条明显条带,其N端氨基酸序列和相对分子质量与设计序列100%一致,Western blot结果显示BIB可以与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应。结论成功构建了幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌,该工程菌表达的BIB蛋白抗原性良好。

关 键 词：幽门螺杆菌  多表位疫苗 尿素酶B亚单位 尿素酶I亚单位  霍乱毒素B亚单位

分 类 号：R392]