文献类型：期刊文章

作　　者：李长红[1] 杨智景[1] 李明云[1] 陈炯[1]

机构地区：[1]宁波大学生物与海洋科学系,宁波315211

出　　处：《农业生物技术学报》

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)项目(No.2012AA10A403);浙江省重大科技专项(No.2012C12907);宁波市自然科学基金(No.2013A610160和No.2014A610187);浙江省教育厅科研项目(理)(No.Y201327619)

年　　份：2015

卷　　号：23

期　　号：5

起止页码：623-633

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、JST、RCCSE、UPD、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：Wap65-2(warm temperature acclimation related 65 k D protein-2)是在硬骨鱼类中发现的一种血浆糖蛋白,与细菌感染引起的免疫应答密切相关。本研究通过大黄鱼(Larimichthys crocea)肝组织转录组测序获得了大黄鱼Lc Wap65-2基因全长c DNA(Gen Bank登录号:KJ412463)。结果表明,Lc Wap65-2基因由1 585个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码432个氨基酸,预测分子量为48.84 k D,等电点为5.36,N末端20个氨基酸为信号肽。氨基酸序列多重比对分析表明,Lc Wap65-2具有鱼类Wap65-2的典型结构特征,Lc Wap65-2与鮸鱼(Miichthys miiuy)Wap65-2同源性最高(87.4%);系统进化树分析表明,鱼类Wap65-2形成一个大簇,Lc Wap65-2与鮸鱼Wap65-2进化相关性最高。基因组结构分析表明,Lc Wap65-2基因组DNA序列(Gen Bank登录号:KJ412464)由10个外显子和9个内含子组成。实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)结果显示,Lc Wap65-2 m RNA主要在健康大黄鱼肝组织中表达,在脑中有少量表达;溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)感染后大黄鱼肝组织中Lc Wap65-2 m RNA表达量显著上调(P<0.05),在感染8 h时达到峰值。原核表达大黄鱼Wap65-2成熟肽(Lc Wap65-2m),并制备了抗血清,Western blot分析表明,溶藻弧菌感染后大黄鱼血清Wap65-2表达量在4 h时无明显变化,8 h后显著上调(P<0.05)。大黄鱼Wap65-2基因及蛋白的表达与溶藻弧菌感染过程紧密相关,揭示其可能在鱼类抗感染免疫应答中发挥重要作用。研究结果为进一步研究鱼类Wap65-2的功能及其在病原菌感染免疫中的分子机制提供基础资料。

关 键 词：Wap65-2  大黄鱼 溶藻弧菌 基因表达 系统发育树分析  

分 类 号：S858.28]