文献类型：期刊文章

作　　者：王鹏[1] 郑兆鑫[1] 刘明秋[1]

机构地区：[1]复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心,上海200433

出　　处：《中国生物工程杂志》

基　　金：国家科技重大专项(2013ZX08007-004);教育部留学回国人员科研启动基金;上海市科学技术委员会项目(13DZ2252000)资助项目

年　　份：2015

卷　　号：35

期　　号：3

起止页码：1-7

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2014、CAB、CAS、CSCD、CSCD2015_2016、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒(PRV)具有抑制作用。方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪Mx1和牛Mx1基因,并克隆到pc DNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法将其分别导入到PK-15细胞,从mRNA水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况,然后用细胞毒性试剂盒检测这两种蛋白是否对PK-15细胞具有毒性。之后,通过荧光定量PCR检测猪Mx1和牛Mx1在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对PRV的抑制情况,并观察100TCID50病毒攻击细胞72h后的病变程度。结果:成功克隆了猪Mx1和牛Mx1基因,经mRNA水平和蛋白质水平证实,两种重组质粒在PK-15细胞内能够正常表达。从荧光定量PCR和细胞病变的角度来看,细胞内表达的Mx1蛋白对PRV具有显著性的抑制(P<0.001)。结论:猪Mx1和牛Mx1基因在PK-15细胞中表达的Mx1蛋白能够抑制PRV在胞内的复制。

关 键 词：猪Mx1  牛Mx1  PK-15细胞 伪狂犬病病毒

分 类 号：Q812[生物工程类]