文献类型：期刊文章

作　　者：王可心[1] 李煦照[1] 徐红英[2] 张宁[1] 刘树民[3]

机构地区：[1]黑龙江中医药大学中医药研究院中药毒理学实验室,哈尔滨150040 [2]黑龙江中医药大学中医药研究院细胞生物学研究室,哈尔滨150040 [3]黑龙江中医药大学药物安全性评价中心,哈尔滨150040

出　　处：《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81073019);高等学校博士学科点专项科研基金(20102327110004)

年　　份：2015

卷　　号：31

期　　号：1

起止页码：4-8

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、PROQUEST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：为检测a-突触核蛋白(a-Synuclein)在人神经元母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中的表达,构建人野生型(WT)和A53T突变型a-Synuclein质粒(p EGFP-SNCA-WT和p EGFP-SNCA-A53T),经酶切鉴定无误后转染SH-SY5Y细胞,并对转染完成的细胞进行嘌呤霉素筛选,然后通过PCR法扩增转染后SH-SY5Y细胞的a-Synuclein片段,并对其进行测序,检测目的基因,运用Western blot法检测转染后SH-SY5Y细胞中a-Synuclein的表达.酶切鉴定结果表明p EGFP-SNCA-WT和p EGFP-SNCA-A53T质粒构建成功,嘌呤霉素筛选和转基因细胞a-Synuclein片段测序结果显示慢病毒表达载体能成功的整合到SH-SY5Y细胞基因组中,Western blot结果表明,转染后的SH-SY5Y细胞能成功的过表达a-Synuclein.a-Synuclein慢病毒表达载体构建成功,并且SH-SY5Y细胞作为宿主细胞能够表达a-Synuclein.为今后帕金森病(PD)体外模型的建立及帕金森病发病机制的研究奠定了基础.

关 键 词：a-突触核蛋白  慢病毒表达载体 人神经元母细胞瘤细胞  帕金森病

分 类 号：R741]