文献类型：期刊文章

作　　者：郭佳[1] 尹衍新[1] 蒋明[1] 于丽华[1] 蒋韵[1] 李贵情[1] 房健民[1]

机构地区：[1]同济大学苏州研究院生物医药中心,苏州215000

出　　处：《生物医学工程学杂志》

基　　金：江苏省自然科学基金资助项目(BK2012162);苏州市科技发展计划资助项目(SYG201131);苏州市生物新药创制重点实验室资助项目(SZS201002)

年　　份：2015

卷　　号：32

期　　号：2

起止页码：400-404

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、EI、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：本研究构建含人肝细胞生长因子受体(C-Met)胞外区基因的慢病毒表达载体,并将其转染293T细胞,真核表达并纯化获得人C-Met胞外段蛋白。采用RT-PCR扩增人C-Met胞外区(ED)基因,构建慢病毒表达载体p RRL-CMV-ED,磷酸钙法转染293T细胞,RT-PCR及Western blot法检测ED基因在293T细胞中mRNA的转录和蛋白表达。PCR扩增及测序结果表明成功构建了p RRL-CMV-ED慢病毒表达载体,PCR扩增的目的基因大小为2 700bp左右;转染p RRL-CMV-ED的293T细胞上清经镍柱亲和纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在105kD处有明显蛋白条带;Western及ELISA结果显示,纯化蛋白为C-Met胞外区蛋白且能与肝细胞生长因子(HGF)特异性结合。本研究结果可能为制备C-Met单克隆抗体以及筛选阻断HGF/C-Met信号通路的中和抗体奠定基础。

关 键 词：人肝细胞生长因子受体  慢病毒表达载体 转染  表达  

分 类 号：Q786]