文献类型：期刊文章

作　　者：赵建敏[1,2] 王建武[2] 孟如杰[2] 付明波[2] 王慧敏[2] 汤波[2] 陈敏[1] 李宁[3]

机构地区：[1]中国农业大学食品工程学院,北京100193 [2]无锡科捷诺生物科技有限责任公司,江苏无锡214145 [3]中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京100193

出　　处：《中国生物制品学杂志》

基　　金：农业部重大专项(2012ZX08014002);国家"863"计划(2011-AA100601)

年　　份：2015

卷　　号：28

期　　号：2

起止页码：182-189

语　　种：中文

收录情况：AJ、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2015_2016、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的建立转基因牛乳中重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rh LF)的中试纯化工艺,并分析纯化的rh LF的活性。方法以含rh LF的转基因牛乳为原料,通过陶瓷膜分离技术除菌,一步阳离子交换层析,非离子型去污剂与金属络合剂去除内毒素,以及超滤浓缩脱盐,冷冻干燥制备重组蛋白纯品等步骤纯化rh LF,采用SDSPAGE、凝胶过滤色谱(SEC-HPLC)法和反相色谱(RP-HPLC)法分析rh LF的纯度;ELISA法检测rh LF的含量;鲎试剂法检测rh LF的内毒素含量;圆二色谱技术分析rh LF的二级结构;并检测rh LF的铁结合能力和抑菌活性。结果纯化的rh LF的平均纯度可达96%,内毒素含量小于0.5 EU/mg,整个工艺回收率达75%,且具有与天然人乳铁蛋白(human lactoferrin,h LF)相近的二级结构及正常的铁结合能力和抑菌活性。结论建立的牛乳中rh LF的中试纯化工艺简便高效,适用于rh LF的规模化生产。

关 键 词：重组人乳铁蛋白  转基因牛乳  离子交换色谱法  铁结合活性  抑菌活性

分 类 号：Q819[生物工程类] TS252.41]