文献类型：期刊文章

作　　者：董莲华[1] 张玲[1] 姜君[2] 王江南[3] 王晶[1] 陈唯军[2]

机构地区：[1]中国计量科学研究院,北京100029 [2]中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室,北京100029 [3]北京市计量检测科学研究院北京100029

出　　处：《分析化学》

基　　金：中国计量科学研究院基本科研业务费资助项目(Nos.AKY1323-14,AKY1408-14)

年　　份：2015

卷　　号：43

期　　号：3

起止页码：319-324

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2014、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2015_2016、EBSCO、EI、IC、JST、RCCSE、RSC、SCIE、SCOPUS、UPD、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：以大肠杆菌O157∶H7（E.coli O157∶H7）rfb E基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR（dd PCR）方法。对dd PCR反应中的探针浓度进行了优化,考察了方法的线性范围、精密度、定量限和检出限。最终确定dd PCR反应中的最佳探针浓度为300 nmol/L。E.coli O157∶H7基因组DNA浓度范围为4-1.25×105拷贝/20μL dd PCR反应液时,dd PCR方法线性相关系数（R2）为0.999。当DNA浓度为760-88400拷贝/20μL时,方法的精密度最好（RSD〈5%）。本方法的定量限为4拷贝/20μL,检出限为3拷贝/20μL。特异性验证结果表明,建立的dd PCR方法特异性良好,对13份猪肉、牛肉和鸡肉样品的检测结果与定量PCR方法检出结果一致。

关 键 词：微滴数字聚合酶链式反应  大肠杆菌O157∶H7  拷贝数

分 类 号：O655.2]