文献类型：期刊文章

作　　者：冯娟[1] 覃炎锋[1] 李荷[1]

机构地区：[1]广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系,广州510006

出　　处：《应用与环境生物学报》

基　　金：国家自然科学基金项目(30970107);广东省科技厅项目(2012B010300021);广东省教育厅项目(2013KJCX0107)资助~~

年　　份：2014

卷　　号：20

期　　号：6

起止页码：1076-1081

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、IC、JST、PROQUEST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600 nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95%以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.

关 键 词：漆酶 大肠杆菌 表达条件优化 染料降解

分 类 号：Q78] X172]