文献类型：期刊文章

作　　者：吴全德[1] 黄文林[1,2,3,4,5]

机构地区：[1]中国科学院微生物研究所,北京100101 [2]中山大学附属肿瘤医院,广东广州5100103 [3]广东省肿瘤靶向治疗新药研发企业重点实验室,广东广州5106634 [4]广东省发展和改革委员会基因药物工程实验室,广东广州5106635 [5]广州达博生物制品有限公司,广东广州510663

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：广东省科技计划项目(No.2011A080502010);十二五重大新药创制项目(No.2012ZX09401015)资助~~

年　　份：2014

卷　　号：30

期　　号：11

起止页码：1786-1790

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：腺病毒载体是极具发展前景的基因治疗载体之一,为获得一条新型腺病毒规模化生产工艺,研究采用5 L振荡激流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞来生产重组腺病毒载体。细胞经种子链逐步扩增后,接种至AP10生物反应器,采用CD293无血清培养基流加培养悬浮HEK293细胞,细胞密度达约2.0×106个/m L时,以30 MOI(Multiplicity of infection)感染重组Ad-IFNγ(Recombinant adenovirus-interferon gamma),48 h后收获细胞,3次冻融裂解离心收获上清病毒粗产品。采用壳蛋白免疫法快速测定粗产品滴度。结果表明,采用振荡激流式一次性生物反应器,流加HEK293细胞悬浮培养6 d,密度可达2.0×106个/m L,Ad-IFNγ粗产量达1.49×1013 IFU(Infectious unit),单细胞包装量达3 800 IFU/cell。采用阴离子交换层析法纯化重组腺病毒,回收率35.9%。建立了利用5 L激流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产重组腺病毒载体Ad-IFNγ的初步工艺。

关 键 词：重组腺病毒 HEK293细胞悬浮培养  一次性生物反应器  分离纯化  阴离子交换层析  

分 类 号：R346[基础医学类]