文献类型：期刊文章

作　　者：王雷[1] 崔震海[1] 张立军[1]

机构地区：[1]沈阳农业大学生物科学技术学院/辽宁省植物基因工程技术研究中心,辽宁沈阳110866

出　　处：《江苏农业科学》

基　　金：国家自然科学基金(编号:31000673);教育部博士点基金(编号:20102103110001;20102103120001);辽宁省科技厅科技攻关项目(编号:201201238)

年　　份：2014

卷　　号：42

期　　号：11

起止页码：26-29

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：以玉米自交系郑58基因组DNA为模板,设计了2对特异性引物,分别PCR扩增玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)启动子及其全长编码序列,利用In-Fusion技术将两者定向克隆到载体p CAMBIA-1391Z上,并对重组子进行测序验证。结果表明,该PEPC启动子序列与Gen Bank中的玉米自交系B73的同源性为97.70%,片段长1 200 bp;全长编码序列同源性为97.90%,片段长6 330 bp。通过HindⅢ和EcoRⅠ酶切载体p CAMBIA-1391Z,利用In-Fusion技术将线性载体与之前获得的2个PCR片段连接,测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p CAMBIA-1391Z-PEPC植物表达载体。对克隆和载体构建中存在的问题进行了讨论,以期为该类型基因的高效克隆及表达载体的构建提供参考、为C4型PEPC基因功能研究和C3植物遗传转化提供可用的基因序列。

关 键 词：玉米 PEPC 基因克隆 序列分析  表达载体构建

分 类 号：Q786] S513.01]