文献类型：期刊文章

作　　者：赵树弥[1] 朱灵[1,2] 朱灿灿[1] 李阳[1] 王华东[1] 张龙[1,2] 堵棣威[1] 邓国庆[1,2] 王安[1] 刘勇[1,2]

机构地区：[1]中国科学院安徽光学精密机械研究所,安徽省生物医学光学仪器工程技术研究中心,合肥230031 [2]皖江新兴产业技术发展中心,铜陵244000

出　　处：《分析化学》

基　　金：中国科学院战略性先导科技专项基金(No.XDA08040109)资助项目

年　　份：2014

卷　　号：42

期　　号：10

起止页码：1393-1399

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、EBSCO、EI、IC、JST、RCCSE、RSC、SCIE、SCOPUS、UPD、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：集成核酸提取的实时荧光PCR微全分析系统将核酸提取、PCR扩增与实时荧光检测进行整合，在同一块微流控芯片上实现了核酸分析过程的全自动和全封闭，具有试剂用量少、分析速度快、操作简便等优点。本研究采用微机械加工技术制作集成核酸提取微流控芯片的阳极模，使用组合模具法和注塑法制作具有3D通道的PDMS基片，与玻璃基底通过等离子体键合封装成集成核酸提取芯片。构建了由微流体速度可调节（0～10 mL/min）的驱动控制装置、温控精度可达0.1℃的TEC温控平台、CCD检测功能模块等组成的微全分析系统。以人类血液裂解液为样品，采用硅胶膜进行芯片上核酸提取。系统根据设置好的时序自动执行，以2 mL/min的流体驱动速度完成20μL裂解液上样、清洗；以1 mL/min的流体驱动速度完成DNA洗脱，抽取PCR试剂与之混合注入到反应腔。提取的基因组DNA以链上内参基因GAPDH为检测对象，并以传统手工提取为对照，在该系统平台上进行PCR扩增和熔解曲线分析实验。片上PCR扩增结果显示，扩增曲线明显， Ct值分别为25.3和26.9。扩增产物进行熔解曲线分析得到的熔解温度一致，均为89.9℃。结果表明，此系统能够自动化、全封闭的在微流控芯片上完成核酸提取、PCR扩增与实时定量分析。

关 键 词：核酸提取  微全分析系统 实时荧光PCR 微流控芯片

分 类 号：O629.74] O657.3[化学类]