文献类型：期刊文章

作　　者：谢彬彬[1] 章庆伟[1] 陈亲芬[1] 白炳君[1] 林季[1] 刘文权[1] 梁韶晖[1]

机构地区：[1]温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室,浙江温州325035

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：浙江省自然科学基金项目(No.Y2100971);浙江省大学生科技创新活动计划项目(No.2013R413013);温州医科大学本专科学生科研课题项目(No.wyx201201026)

年　　份：2014

卷　　号：9

期　　号：9

起止页码：820-823

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CSCD、CSCD_E2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建弓形虫RH株微线体蛋白M2AP和MIC2的真核表达载pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为建立同时表达MIC2和M2AP蛋白的重组毕赤酵母表达系统,制备重组粘附蛋白复合体MIC2-M2AP奠定基础。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆转录合成cDNA。根据已知的弓形虫mic2和m2ap基因序列,采用引物设计软件Primer premier5.0自行设计并合成引物,以cDNA为模板,PCR扩增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T载体,经酶切和测序鉴定后回收目的片段,分别插入至pGAPZαA内,构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,转化入E.coli DH5α。提取转化菌质粒,进行酶切和测序鉴定。结果 PCR扩增得到的mic2和m2ap基因分别为2 200bp和1 000bp,与预期大小一致。T-A克隆重组质粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重组酵母表达质粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap经测序鉴定,与GenBank收录的弓形虫mic2基因和m2ap基因序列同源性为100%,重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap构建成功。结论成功构建弓形虫重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为进一步研究MIC2和M2AP相互作用机制及其免疫保护效应奠定了基础。

关 键 词：刚地弓形虫 MIC2  M2AP  真核表达

分 类 号：R382.5]