文献类型：期刊文章

作　　者：王美晨[1] 王璇[2,3] 蓝茜[2,3] 李玥[2,3] 刘莉[2,3] 伊静[2,3] 李靖[2,3] 宋刘梅[1] 马莎蕊[1] 宁启兰[2,3] 李冬民[2,3]

机构地区：[1]西安交通大学医学部 [2]西安交通大学医学部遗传学与分子生物学系,陕西西安710061 [3]西安交通大学医学部环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安710061

出　　处：《国外医学（医学地理分册）》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.81370952);陕西省科技计划资助项目(No.2013K21-22-03);国家级大学生创新训练资助项目(No.201310698055);西安交通大学本科生科研训练和实践创新基金资助项目(No.2013273及No.2014X15003)

年　　份：2014

卷　　号：35

期　　号：3

起止页码：189-193

语　　种：中文

收录情况：CAS、JST、UPD、普通刊

摘　　要：目的利用pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector(简称为pmirGLO报告基因载体)构建并鉴定含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体(pmir-Insr-3′UTR及pmirmutant-Insr-3′UTR)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区);用PmeI、XbaI双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中均插入目的片段;DNA测序结果进一步证实pmir-Insr-3UTR重组载体中成功插入了胰岛素受体mRNA 3′UTR区,pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了在miR-497结合位点含有3个突变碱基的胰岛素受体mRNA 3′UTR片段。结论成功构建了含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR报告基因载体pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR。

关 键 词：胰岛素受体 mRNA  3′UTR区  pmirGLO  报告基因载体  目的片段  重组载体  

分 类 号：R331]