文献类型：期刊文章

作　　者：茹晓荣[1] 刘永兰[2] 向安[2]

机构地区：[1]西安医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室,西安市710021 [2]第四军医大学药学系药物基因组学教研室,西安市710032

出　　处：《医学分子生物学杂志》

年　　份：2014

卷　　号：11

期　　号：5

起止页码：252-256

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSA、CSA-PROQEUST、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的：构建稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxicTlymphocyteantigen-4，CTLA-4）的293T细胞株。方法首先从人外周血获取PBMC加以T细胞活化；PCR扩增CTLA-4转录本，连接pUCm-T质粒引入HindⅢ和EcoRⅠ双酶切位点后转入真核细胞表达质粒pcDNA3．1；重组质粒pcDNA3．1-CTLA-4经脂质体转染293T细胞，以抗生素G418筛选表达CTLA-4的293T细胞；定量PCR、免疫荧光分别检测293T细胞CTLA-4表达与细胞定位。结果血样来源T细胞经活化后表达CTLA-4转录本。HindⅢ和EcoRⅠ双酶切证实重组质粒内CTLA-4插入序列正确；RT-PCR及免疫荧光检测证实293T细胞能够稳定表达目的蛋白CTLA-4，并定位于细胞膜表面。结论成功构建的pcDNA3．1-CTLA-4重组真核表达载体，在293T细胞膜表面实现了稳定表达，为进行相关生物学理论与应用研究打下基础。

关 键 词：T淋巴细胞相关抗原-4  293T细胞 基因克隆 真核表达

分 类 号：R349.6[基础医学类]