文献类型：期刊文章

作　　者：王雪鹏[1,2] 李茂强[1,2] 边振宇[1,2] 季成[1,2] 何齐芳[1,2] 姚旺祥[1,2] 朱六龙[1,2]

机构地区：[1]杭州市第一人民医院骨科 [2]南京医科大学附属杭州医院骨科,杭州310006

出　　处：《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》

基　　金：卫生部医药卫生科技发展中心医学科研专项课题(W2013ZT205);浙江省卫生厅一般项目(02012KYA146);杭州市卫生局重点项目(2012Z003)

年　　份：2014

卷　　号：7

期　　号：3

起止页码：250-257

语　　种：中文

收录情况：JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Western blot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72 h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强(P<0.05)。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组(P<0.05)。成骨诱导培养3和7 d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组(P<0.05)。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7 d也显著高于1μmol/L组(P<0.05)。Western blot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7 d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix 4种基因mRNA表达(均P<0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。

关 键 词：PI3K/AKT信号通路 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 成骨分化

分 类 号：R681]