文献类型：期刊文章

作　　者：李文清[1,2] 王加启[1] 南雪梅[1,3] 卜登攀[1,3,4]

机构地区：[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京100193 [2]河南农业大学生命科学学院,郑州450002 [3]CAAS-ICRAF农用林业与可持续畜牧业联合实验室,北京100193 [4]东北农业大学,食品安全与营养协同创新中心,哈尔滨150030

出　　处：《动物营养学报》

基　　金：十二五科技支撑计划课题(2012BAD12B02-5);中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS07);动物营养学国家重点实验室自主课题(2004DA125184G1103)

年　　份：2014

卷　　号：26

期　　号：9

起止页码：2607-2614

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：本试验旨在建立一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,并研究不同激素和细胞因子对其表达β-酪蛋白mRNA的诱导作用。分别采用组织块培养法和机械破碎法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用成纤维细胞和乳腺上皮细胞对胰酶的敏感性不同,对获得的细胞进行纯化。通过细胞计数法测定纯化细胞的生长曲线,通过免疫荧光组织化学染色法检测角蛋白18的表达,通过实时定量PCR法检测8种不同激素和细胞因子组合培养液诱导细胞表达β-酪蛋白mRNA的效果。结果表明:通过机械破碎法可以分离得到增殖旺盛的奶牛乳腺上皮细胞,与组织块培养法相比,具有细胞迁出速度快等优点。细胞生长曲线呈典型的"S"型。在纯化的乳腺上皮细胞及第20代乳腺上皮细胞中都检测到角蛋白18的表达。100 ng/mL类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)显著提高了乳腺上皮细胞中β-酪蛋白mRNA的表达(P<0.05)。由结果可知,本试验采用的机械破碎法是一种高效的奶牛乳腺上皮细胞培养方法,100 ng/mL IGF-Ⅰ对细胞中β-酪蛋白mRNA表达的诱导效果最好。

关 键 词：原代细胞培养 乳腺上皮细胞 激素 β-酪蛋白mRNA  

分 类 号：S823]