文献类型：期刊文章

作　　者：张辉[1] 贾英[1] 王珍玉[2] 邓继峰[1] 王海峰[1] 戴仁科[1] 黄黎珍[1]

机构地区：[1]华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006 [2]中山珐玛斯医药科技有限公司,广东中山528400

出　　处：《广东药学院学报》

基　　金：国家自然基金(81202585);中央高校基本科研业务费专项资金(2014ZM0067)

年　　份：2014

卷　　号：30

期　　号：4

起止页码：493-496

语　　种：中文

收录情况：CAB、CAS、IC、RSC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的建立乳腺癌耐药蛋白BCRP高效稳定表达COS-7细胞系,为相关药物的药物转运及其耐药性研究奠定基础。方法采用RT-PCR技术从MCF-7/ADR乳腺癌细胞中扩增出乳腺癌耐药蛋白基因BCRP的cDNA序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP,将重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP转染COS-7细胞,经G418筛选后获得抗性细胞克隆。运用基因组PCR、SDSPAGE鉴定抗性细胞中外源BCRP基因的整合及表达,并以BCRP底物mitoxantrone对鉴定阳性的细胞克隆进行转运活性验证。结果成功克隆BCRP的cDNA并构建真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-BCRP。转染COS-7细胞后获得抗性克隆10个,PCR鉴定阳性有4个,其中2个克隆能高效表达BCRP蛋白。经活性验证,2个高表达的细胞克隆中有一个能显著高效外排BCRP底物mitoxantrone,显示良好的生物活性功能。结论成功建立一株BCRP高效稳定表达的COS-7细胞系,且具有特异性生物活性,可用于BCRP相关药物转运及耐药性研究。

关 键 词：乳腺癌耐药蛋白 药物转运 COS-7

分 类 号：R346[基础医学类]