文献类型：期刊文章

作　　者：谭小庆[1] 邓鹏[1] 吴颖[1] 白群华[1] 贾燕[1] 肖虹[1]

机构地区：[1]重庆医科大学公共卫生与管理学院卫生检验教研室,重庆400016

出　　处：《重庆医科大学学报》

基　　金：重庆市自然科学基金计划资助项目(编号:2010BB5360)

年　　份：2014

卷　　号：39

期　　号：7

起止页码：973-977

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、IC、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的：克隆沙雷氏菌CQMUS2中铬还原酶T（Chromate reductaseT，ChrT）的全基因，构建其原核表达载体并转化至大肠杆菌中表达蛋白。分析表达产物的活性。方法：应用PCR技术，以耐铬沙雷氏菌CQMUS2基因组DNA为模板扩增chrT全基因。将该基因连接至表达载体pET-28a（＋）并转化进大肠杆菌感受态细胞E．coli BL21（DE3）表达，用酶促反应鉴定重组chrT酶的活性和cr（Ⅵ）还原能力，探索其最适pH和温度。结果：克隆出的chrT全基因长为567bp，编码188个氨基酸，分子量约20kD：IPTG诱导10h后，在大肠杆菌中成功表达了目的蛋白，其碱基序列和分子量与ch门酶一致；纯化后，chrT酶能还原酶促反应体系中的cr（Ⅵ）。使实验组cr（Ⅵ）含量明显低于对照组（P=0．000），其酶活可达997U／L；ChrT酶的最适pH为6．5-7．5，最适温度为37℃。结论：ChrT酶具有cr（VI）还原活性，为进一步研究高效除铬基因工程菌奠定了基础。

关 键 词：沙雷氏菌  铬还原酶  克隆 表达  六价铬 还原  

分 类 号：Q786]