文献类型：期刊文章

作　　者：关新刚[1] 苏维恒[2] 于欣[3] 佟海滨[1] 孙新[1]

机构地区：[1]北华大学生命科学研究中心,吉林吉林132013 [2]吉林大学生命科学学院艾滋病疫苗国家工程实验室,吉林长春130012 [3]东北师范大学附属中学高中部生物组,吉林长春130021

出　　处：《吉林大学学报（医学版）》

基　　金：国家自然科学基金资助课题(81150015);吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题(20111809);吉林省吉林市科技局科技发展计划项目资助课题(201233126)

年　　份：2014

卷　　号：40

期　　号：4

起止页码：725-728

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、EMBASE、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的:获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白(GFP)标记的Tat-GFP融合蛋白,探讨Tat-GFP在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法:应用pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,检测不同异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度(0.5和1.0mmol·L-1)和不同温度(22℃和37℃)诱导融合蛋白的表达情况;利用Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白,利用GFP特异性抗体采用Western blotting法分析洗脱液中的蛋白;激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP融合蛋白的跨膜转运活性。结果:0.5和1.0mmol·L-1 IPTG诱导出的细菌总蛋白中所含的Tat-GFP蛋白量无明显差异;低温(22℃)诱导生产的Tat-GFP蛋白量较37℃更高;Western blotting分析,GFP抗体能够特异性识别PVDF膜上的蛋白,条带灰度与Tat-GFP蛋白上样量有关联;细胞穿膜实验,绿色荧光分布于MCF-7细胞的细胞质和细胞核中。结论:低温诱导时大肠杆菌BL21菌体上清液中Tat-GFP融合蛋白量更高,所生产的Tat-GFP融合蛋白既具备穿膜活性又具有易于检测的绿色荧光。

关 键 词：Tat-GFP  细胞穿膜肽  融合蛋白 穿膜活性  

分 类 号：Q78]