文献类型：期刊文章

作　　者：钟晓武[1,2,3] 付强[1] 邹颉[1] 赵杰宏[1] 林世锋[1] 郭玉双[1] 任学良[1]

机构地区：[1]贵州省烟草科学研究院,烟草行业烟草分子遗传重点实验室 [2]川北医学院附属医院,医学研究中心 [3]川北医学院基础医学院生物学教研室

出　　处：《烟草科技》

基　　金：贵州省科技厅农业攻关项目"烤烟种质资源鉴定与创新及新品种选育研究"(黔科合NY字[2011]3047号);中国烟草总公司重点项目"烤烟育种新技术与新一代烤烟新品种选育研究"(中烟办[2010]221号);贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金"贵州主推烟草品种基因组结构研究"(黔科合人字[2013]02号)

年　　份：2014

卷　　号：47

期　　号：7

起止页码：69-74

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、EI、IC、INSPEC、JST、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41。通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15Ⅲ下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白。

关 键 词：烟草 糖基转移酶 基因 蛋白酶

分 类 号：TS413]