文献类型：期刊文章

作　　者：李敏[1] 扈荣良[2] 王玉炯[1] 张守峰[2] 赵君[2]

机构地区：[1]宁夏大学生物工程系,宁夏银川750021 [2]军需大学军事兽医研究所,吉林长春130062

出　　处：《宁夏大学学报（自然科学版）》

基　　金：全军医药卫生科研基金重点课题 (6 0Z0 5 0 );教育部骨干教师资助计划项目

年　　份：2002

卷　　号：23

期　　号：1

起止页码：71-75

语　　种：中文

收录情况：CAS、MR、RCCSE、ZGKJHX、ZMATH、普通刊

摘　　要：利用PCR技术 ,获得了人体组织型纤溶酶原激活剂tPAcDNA的缺失突变体———rPA ;在此基础上 ,运用定点突变技术 ,得到rPA的定点突变体———rPA(KHRR2 96～ 2 99AAAA) ,rPA(A473S)和二者的复合突变体rPA(KHRR2 96～2 99AAAA A473S) ;将rPA及其 3个突变体分别亚克隆至原核表达载体pET 2 8a(+)中 ,获得表达载体pErA ,pErA(K) ,pErA(A)和pErA(KA) .酶切鉴定和序列分析结果均表明实现了实验设计的氨基酸突变 .表达载体转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导、菌体裂解及SDS PAGE电泳分析发现 ,只缺失而无突变的pErA和突变的pErA(A)都未表达目的蛋白 ,突变体pErA(K)与pErA(KA)则获高水平表达 ;蛋白产量分别占菌体总蛋白的 35 .97%与 37.71% ,分子量均为 39.6kD .Westernblotting显示 ,表达产物与抗tPA抗体呈特异性阳性反应 .该产物经初步纯化后进行复性与活性 (mFAPA)测定 ,结果表明其复性产物具有明显的体外纤溶活性 .以上结果为rPA突变体的进一步纯化。

关 键 词：重组纤溶酶原激活剂  突变体 基因表达 PCR技术 纤溶活性 溶栓药物

分 类 号：Q786] Q556