文献类型：期刊文章

作　　者：付亚茹[1] 孙阳阳[1] 王洪星[1] 刘小盾[1] 曲廷瑜[1]

FU Ya-Ru;SUN Yang-Yang;WANG Hong-Xing;LIU Xiao-Dun;QU Ting-Yu(Shandong Province Qilu Stem Cell Engineering Company Limitied,Jinan 250102,Shandong Province,China)

机构地区：[1]山东省齐鲁干细胞工程有限公司,山东济南250102

出　　处：《中国实验血液学杂志》

年　　份：2019

卷　　号：27

期　　号：1

起止页码：215-220

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD2019_2020、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)洗涤,获得总有核细胞(TNCs),将TNCs接种至培养皿中诱导扩增EPC。使用流式细胞术和免疫荧光方法鉴定EPC并确定纯度。采用下列方法体外鉴定内皮祖细胞的功能:荧光显微镜观察细胞特异性摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的功能、在基质胶中形成毛细管样结构的情况,ELISA法检测释放VEGF因子的功能。结果:培养3周后,出现1-5个鹅卵石铺路石样内皮祖细胞集落。体外培养第1-3代EPC,其表面CD31、CD34、CD144和VEGFR (CD309)标记阳性率分别为(92. 91±5. 20)%、(30. 0±23. 27)%、(88. 55±3. 83)%和(67. 21±12. 12)%。EPC细胞具有特异性内吞Dil-Ac-LDL和FITCUEA-I、形成毛细管结构,释放低浓度VEGF因子等功能。结论:采用本方法从冻存脐带血中分离EPC的稳定性与重复性高,从冻存的脐带血中分离EPC的成功率可提高至85%。该方法为临床应用丰富的内皮祖细胞奠定了基础。

关 键 词：冻存脐带血  内皮祖细胞 细胞分离 生物学特性鉴定

分 类 号：R331.1] R329.28[基础医学类]