文献类型：期刊文章

作　　者：郭慕真[1] 朱晨笛[1] 蔡倩[2] 许延龙[3] 黄敏[1]

Guo Muzhen;Zhu Chendi;Cai Qian;Xu Yanlong;Huang Min(School of Public Health,Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,China)

机构地区：[1]宁夏医科大学公共卫生与管理学院,职业卫生与环境卫生学系,银川750004 [2]宁夏医科大学公共卫生与管理学院实验中心,银川750004 [3]宁夏医科大学公共卫生与管理学院临床医学院,银川750004

出　　处：《中华劳动卫生职业病杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(81560538);宁夏高等学校一流学科建设(公共卫生与预防医学学科)资助项目(NXYLXK2017B08).

年　　份：2018

卷　　号：36

期　　号：12

起止页码：881-889

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2017、CAS、CSCD、CSCD_E2017_2018、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 探讨经典型蛋白激酶C(cPKC:PKC α、PKC β)是否通过调控紧密连接蛋白(tight Junction,TJ)的表达,引起百草枯(paraquat,PQ)致小鼠脑微血管内皮细胞通透性的异常。 方法 体外培养小鼠脑组织来源的血管内皮细胞株(bEnd.3)作为单层血脑屏障模型,通过Millicell-ERS细胞电阻仪测定跨内皮细胞电阻(TEER)、荧光素钠(Na-FLU)通透性测定以评价体外血脑屏障模型的功能。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞相对存活率:终浓度0、50、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,确定剂量-效应关系;终浓度200 μmol/L PQ分别处理细胞6、12、24、48、72 h,确定时间-效应关系。终浓度0、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,免疫荧光(IF)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-5)和基因的表达水平,免疫印迹法(Western blot)测定PKC α、PKC β、p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平;经典PKC抑制剂(Go 6983)1 μmol/L预处理细胞1 h后,200 μmol/L PQ染毒细胞24 h,Western blot法测定ZO-1、Occludin、Claudin-5及p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平。 结果 bEnd. 3细胞的TEER随培养时间延长逐渐升高,于第6 d达到峰值[(114.3±6.9)Ω· cm^2],荧光素钠通透性检测显示,细胞通透性随培养时间延长逐渐降低,于第6天降至(1.7±0.2)cm/min,说明细胞屏障功能良好。与对照组比较,100、200、300 μmol/L PQ染毒组细胞存活率明显降低,200 μmol/L PQ染毒细胞12、24、48、72 h,细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖和时间依赖关系。IF和qRT-PCR显示,随着PQ浓度的升高,ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白和基因表达量明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测显示,与对照组比较,PQ染毒组的p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平明显升高,ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);Go 6983干预组的ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达水�

关 键 词：百草枯 血脑屏障  脑微血管内皮细胞 紧密连接  蛋白激酶Cα/β  

分 类 号：R595.4] R747.9[临床医学类]