文献类型：期刊文章

作　　者：曹阳[1] 高华颖[2] 于黎[2] 袁晓东[3] 李庆伟[2] 汤敏谦[3] 安利佳[1]

机构地区：[1]大连理工大学化工学院生物工程系,辽宁大连116012 [2]辽宁师范大学生命科学院,辽宁大连116029 [3]宝生物工程(大连)有限公司,辽宁大连116600

出　　处：《遗传》

基　　金：辽宁省优秀青年科研人才培养基金资助项目 ( 9730 14 ) ;大连市科委复合型人才基金资助项目 (99-2 )

年　　份：2002

卷　　号：24

期　　号：1

起止页码：9-14

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：通过PCR法直接克隆了 2 .36 6kb的人乳铁蛋白基因cDNA序列及 80 0bp的山羊 β.M乳球蛋白基因 5′端调控序列 ,并连接到表达载体pLNCX中。利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因cDNA的重组质粒pLNCXHLF ,并导入到小鼠乳腺癌细胞株MA.M 782中 ,G418及PCR筛选获得阳性单克隆细胞 ,增殖后 ,转染细胞利用海藻酸钠固定化包埋培养 ,经激素诱导 ,培养液上清通过Western印记检测证明 ,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白 ,分子质量为34kDa;ELISA法测出 ,每升培养基 (含 10 5个细胞 )重组蛋白最高表达量为 6 5mg ;抗菌实验表明 ,所获得的重组人乳铁蛋白具有抑制大肠杆菌生长的作用 ,而且比人乳铁蛋白标准品作用更强。

关 键 词：人乳铁蛋白 脂质体 固定化 细胞表达 基因克隆

分 类 号：Q78]