文献类型：期刊文章

作　　者：李连之[1] 宋爱新[1] 谢毅[2] 黄仲贤[1] E.de Waal[3] U.Kolczak[3] G.W.Canters[3]

机构地区：[1]复旦大学化学系化学生物学实验室,上海200433 [2]复旦大学生命学院遗传学国家重点实验室,上海200433 [3]Leiden Institute of Chemistry, Leiden University

出　　处：《科学通报》

年　　份：2001

卷　　号：46

期　　号：12

起止页码：1005-1008

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EI、IC、JST、MR、RCCSE、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：细胞色素ｃ氧化酶亚基Ⅱ含有可溶性双核铜中心 ＣuＡ结构域蛋白．报道了 Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｖｅｒｓｕｔｕｓ菌ＣuＡ结构域的基因克隆、表达和分离纯化及其初步表征．编码ＣuＡ结构域的基因插入 pＥＴ１１ｄ质粒载体中，于Ｅ．ｃｏｌi ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行表达．结果表明， ＣｕＡ结构域蛋白在这个表达体系中主要以包涵体的形式存在，表达量占菌体总蛋白的１０％左右．经尿素溶解，Ｃｕ～＋／Ｃｕ～２＋重组复性，Ｑ－Ｓｅpｈａｒｏｓｅ快速阴离子交换柱和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ７５凝胶过滤柱纯化，得到了电泳纯的紫红色可溶性蛋白．紫外-可见吸收光谱在４７８nm有较强吸收峰， ５３０nm处有一肩峰，在 ３６０和 ８０６ nm处有弱吸收峰，它们可归属为混价双金属核中心（Ｃｕ２Ｓ２Ｒ２）中Ｃu－Ｃu和Ｃu－Ｃu间的电荷转移与轨道相互作用．圆二色谱表明其二级结构主要为β－折叠形式．荧光激发谱最大波长为 ２８０nm，发射谱最大波长为 ３４５ nm．

关 键 词：细胞色素C氧化酶 CuA结构域蛋白  基因表达  分离纯化 光谱性质 结构表征  基因克隆

分 类 号：Q55]