文献类型：期刊文章

作　　者：智强[1] 周青[2] 任斌[3] 朱年春[1] 赵丽萍[1]

机构地区：[1]安徽桑尼生物技术研究所,合肥230088 [2]安徽医科大学分子生物学实验室,合肥230032 [3]中国科学技术大学生命科学院,合肥230027

出　　处：《安徽医科大学学报》

年　　份：2001

卷　　号：36

期　　号：1

起止页码：18-21

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSA-PROQEUST、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的　研究高效表达葡激酶载体的构建及其体外表达与产物的纯化。方法　用PCR方法扩增葡激酶cDNA ,插入质粒pET 2 2b中构建成表达载体 ,转化入大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导表达 ,表达产物用Q Poros和S Sepharose纯化。 结果　经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为葡激酶重组质粒 ,体外表达产物经离子交换纯化后HPLC纯度达 98%以上 ,SDS PAGE和WesternBlot实验证实该产物为葡激酶。结论　成功构建了重组葡激酶表达载体 ,并经表达纯化获得高纯度葡激酶 ,为产业化和临床应用奠定了良好基础。

关 键 词：聚合酶链反应 葡糖激酶  分离  提纯  大肠杆菌 r-SAK  质粒 HPLC 离子交换 重组葡激酶

分 类 号：Q556.9] Q78