文献类型：期刊文章

作　　者：李倩坤[1] 王盈[1] 张曼玲[1] 杨海元[1] 程俊霖[1,2] 赵丽华[1] 任子健[1] 陈凤娇[1] 万振昆[1] 张纬[1] 李荣凤[1] 戴一凡[1]

机构地区：[1]南京医科大学基础医学院江苏省异种移植重点实验室,210029 [2]南京医科大学附属南京医院临床药理科

出　　处：《中华移植杂志（电子版）》

基　　金：江苏省科技厅江苏省异种移植重点实验室专项经费(BM2012116)

年　　份：2014

卷　　号：8

期　　号：2

起止页码：33-38

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的培育用于异种移植的新型基因改造猪,在α-Gal基因敲除以及膜辅蛋白CD46、血栓调节蛋白(TM)基因转入的基础上,进一步将Ⅱ类反式激活因子基因N端缺失显性负向(CⅡTA-DN)基因转入猪胎儿成纤维细胞,以抑制猪白细胞抗原(SLA)Ⅱ类分子的表达。方法设计合成博来霉素(Zeocin)抗性基因片段,并将其与含有CⅡTA-DN基因的pST205载体连接,构建置于人Tie2增强子和CMVβ-actin启动子下游的pNMU105/CⅡTA-DN表达载体,将线性化的pNMU105通过脂质体转染法转入已经敲除了α-Gal并转入CD46、TM基因的猪胎儿成纤维细胞181B(DKO/CD46/TM)。Zeocin抗性筛选转染pNMU105质粒的181B细胞,PCR方法检测CⅡTA-DN基因在181B细胞中的转入,获得阳性单克隆并进行核移植,得到DKO/CD46/TM/CⅡTA-DN转基因猪。取仔猪的耳缘组织裂解后进行基因鉴定。结果成功设计Zeocin抗性基因片段并构建pNMU105/CⅡTA-DN表达载体,经过质粒转染和Zeocin抗性药物筛选获得多株阳性单克隆,顺利通过核移植得到转基因猪。仔猪耳缘组织经PCR鉴定,在592 bp位置检测到预期条带,证明均为CⅡTA-DN转基因阳性。结论通过新型基因改造猪的培育,在抑制超急性排斥反应和补体反应、降低凝血和人CD4+T细胞免疫反应的理论基础上进行了转基因模型猪的构建,为异种移植中更加有效地减少免疫损伤、提高移植器官的存活做出了新的尝试。

关 键 词：Ⅱ类反式激活因子  显性抑制基因  猪白细胞抗原  异种移植 转基  因猪  

分 类 号：Q943.2[植物生产类]