文献类型：期刊文章

作　　者：李亮[1,2] 张传山[1] 杨乐[1] 王丽敏[1] 吕国栋[1] 王俊华[1] 林仁勇[1,2]

机构地区：[1]新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院,新疆包虫病基础医学重点实验室,新疆乌鲁木齐830054 [2]新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,新疆乌鲁木齐830011

出　　处：《中国病原生物学杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81260252);新疆维吾尔自治区包虫病基础医学重点实验室开放课题(No.XJKLE-2012-4)

年　　份：2014

卷　　号：9

期　　号：5

起止页码：434-437

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CSCD、CSCD_E2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建细粒棘球蚴转化生长因子pII型受体全长（EgTβRⅡ）、受体结合域（EgTβRⅡ-A）和激酶域（EgTβRⅡ-K）的酵母双杂交真核表达载体，检测重组融合蛋白对酵母Y2HOold菌株的毒性作用和自激活活性。方法采用Trizol法提取细粒棘球绦虫总RNA，反转录合成cDNA；PCR扩增EgTβRⅡ—A、EgTβRⅡ—K和EgTβIRⅡ基因，分别克隆入pGADT7、pGBKT7载体中，经PCR、限制性内切酶鉴定及序列测定正确后，采用PEG／I。iAc法转入酵母菌，检测重组融合蛋白对酵母菌毒性和自激活活性。结果构建EgTβRⅡ-A、EgTβR1／-K和EgTβRU的pGADT7、pGBKT7重组质粒，经双酶切和1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，得到长度为406bp、1023bp和1824bp的目的基因片段，与预期结果一致；重组质粒转化酵母菌后形成的菌落与对照质粒pGBKT7转化菌的菌落生长状况一致，直径1．5～2．0mm，而在SD／-Leu／X／AbA、SD／-Trp／X／AbA平板上无菌落生长。结论成功构建EgTβRⅡ-A、EgTCtRⅡ-K和EgTCtRⅡ基因的pGADT7、pGBKT7真核表达载体，其表达蛋白对酵母菌Y2HGold无毒性作用和自激活活性，重组质粒载体可用于酵母双杂交系统，为鉴定EgTL3RII在TGF-β／Smad通路中的生物学功能奠定了理论基础。

关 键 词：细粒棘球蚴 转化生长因子βⅡ型受体  酵母双杂交

分 类 号：R383.33]