文献类型：期刊文章

作　　者：丁炜东[1] 曹丽萍[1] 曹哲明[1] 邴旭文[1] 陈克春[2] 胡晋鸣[3]

机构地区：[1]中国水产科学研究院淡水渔业研究中心/农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室,无锡214081 [2]姜堰市水产技术指导站,姜堰225500 [3]泰州市日盛生态农业发展有限公司,姜堰225599

出　　处：《华中农业大学学报》

基　　金：公益性行业科研专项(201003076);国家自然科学基金项目(31200918);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2013JBFM02;2011JBFA12);江苏省自然科学基金项目(BK2011184);江苏省科技支撑计划(BE2013315);江苏省水产三项工程项目(PJ2011-51)

年　　份：2014

卷　　号：33

期　　号：4

起止页码：99-105

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析,筛选合适的基因片段进行克隆,经RT-PCR扩增得到大小为945bp的片段,经测序鉴定后,将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中,转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1mmol/L IPTG诱导4h观察到有新的重组蛋白获得了表达,采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测,结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1ku,表达产物占菌体总蛋白的42.3%,且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后,得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体,在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗体进行黄鳝性腺免疫组化分析,结果表明其能特异性地与卵巢中的激素受体α反应,在细胞膜上形成褐色沉淀。

关 键 词：黄鳝 雌激素受体 原核表达  抗血清 免疫组化分析

分 类 号：S961.2]