文献类型：期刊文章

作　　者：丁娜娜[1,2] 杨靖[1,3] 潘兴[1,2] 周永君[1,2] 李建春[2] 祝捷[2] 王保宁[1] 李明远[1]

机构地区：[1]四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都610041 [2]四川万可泰生物技术有限责任公司,成都610000 [3]湖北医药学院微生物学教研室,十堰442000

出　　处：《四川大学学报（医学版）》

基　　金：四川省科技厅科技支撑计划项目(No.2014SZ0036);湖北省教育厅科学技术研究项目(No.B2013115)资助

年　　份：2014

卷　　号：45

期　　号：3

起止页码：367-370

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。结果构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。结论成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。

关 键 词：幽门螺杆菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌

分 类 号：R378.2]