文献类型：期刊文章

作　　者：李绍磊[1] 刘云江[1] 牛晓峰[1] 许银峰[1] 易建华[1] 杨有优[2] 江丽[3]

机构地区：[1]中山大学附属第一医院东院上肢骨科,广州510700 [2]中山大学附属第一医院放射科 [3]中山大学附属第一医院骨科研究所

出　　处：《中华显微外科杂志》

基　　金：国家自然科学基金面上项目（31070869）;广东省科技计划项目（2010B031100006,2012B031800383）

年　　份：2014

卷　　号：37

期　　号：2

起止页码：147-151

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CSCD、CSCD2013_2014、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的探索脂肪干细胞（ADSCs）的标记方法，观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性ADSCs（EGFP—ADSCs）的体外活性、干细胞特性及体内短期活性。方法用携带增强型绿色荧光蛋白（eGFP）基因的慢病毒载体（Lv-eGFP）在感染复数（MOI）为0、1、5、25、50、100时，转染SD大鼠ADSCs12h，荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率和荧光强度；Mrrr法评价转染后细胞活性；EGFP—ADSCs分别行成脂分化及油红O检测、成骨分化及茜素红染色；将EGFP—ADSCs注射到去细胞神经构建组织工程化神经，修复大鼠坐骨神经缺损，术后1周取材进行冰冻切片观察细胞在体内存活情况。结果转染4d后，EGFP阳性率及荧光强度达到高峰；EGFP基因表达不随细胞传代而消失。MOI=0、1、5、25、50、100时，EGFP阳性转染率分别为0．13％、31．09％、75．33％、92．66％、96．70％、98．38％。实验组阳性率与对照组（MOI=0）选择相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）；MOI=25、50、100时，组问阳性率差异无统计学意义（P〉0．05），但与MOI=1、5比时差异（P〈0．05）。MTT试验观察10d内MOI=25、50、100组细胞增值活性与非转染细胞差异无统计学意义（P〉0．05）。选择MOI=25作为最佳转染滴度进行后续实验。转染后ADSCs成骨、成脂分化20d，茜素红染色见橘红色钙沉积，油红O染色见橙红色脂滴。1周冰冻切片观察细胞于体内呈梭形，均匀分布。结论慢病毒载体转染EGFP基因不影响ADSCs活性及成骨成脂分化能力，能为组织工程化神经修复缺损提供示踪种子细胞的方法。

关 键 词：脂肪干细胞 转染 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 周围神经

分 类 号：R329]