文献类型：期刊文章

作　　者：张晓磊[1,2] 聂玉哲[1,3] 蓝兴国[1] 李玉花[1]

机构地区：[1]东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040 [2]大庆麦伯康生物技术有限公司,黑龙江大庆163316 [3]东北林业大学大庆生物技术研究院,黑龙江大庆163316

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：黑龙江省发展高新技术产业专项资金(FW11C201);大庆高新区科技专项资金(DQGX10ZS005)

年　　份：2014

卷　　号：30

期　　号：2

起止页码：171-175

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法。方法将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA(HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养。采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,最后建立双抗体夹心ELISA。结果HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105。细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株。经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109L/mol以上。间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的"d,y,r,w"表位结合。用抗HBsAg"a"表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测。结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的"d,y,r,w"表位。结论成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA。

关 键 词：乙型肝炎表面抗原 单克隆抗体 表位 夹心ELISA

分 类 号：R392-33]