文献类型：期刊文章

作　　者：朱小影[1] 陶崑[1] 李身锋[1] 张利军[1] 李亚娟[1] 王东[1] 钟梁[1] 冯文莉(指导)[1]

机构地区：[1]重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室,临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆医科大学,重庆400016

出　　处：《中国免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(No.30871102);重庆医科大学优秀博士论文基金(2009年)资助项目

年　　份：2013

卷　　号：29

期　　号：12

起止页码：1306-1311

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2013_2014、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建单链免疫毒素hscFv-ETA'的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用。方法:采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA'通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFvETA'单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)原核表达载体中,转化BL21(DH3)宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA'与细胞结合的活性以及诱导细胞凋亡的能力。结果:限制性酶切图谱和序列分析证实,在pET32a(+)原核表达载体上成功地构建了hscFvETA'单链免疫毒素载体;该基因在pET32a(+)载体中获得高效表达,表达产物的相对分子质量与预期值相符;经Western blot鉴定证实纯化后的重组免疫毒素hscFv-ETA'融合蛋白是正确的;经FCM证实hscFv-ETA'蛋白能特异性结合CML细胞并诱导细胞凋亡。结论:已成功构建并原核表达单链免疫毒素hscFv-ETA',证明该蛋白能发挥特异性结合并诱导CML细胞凋亡。

关 键 词：慢性粒细胞白血病 重组免疫毒素 克隆  原核表达  凋亡  

分 类 号：R733.72]