文献类型：期刊文章

作　　者：张锋[1] 高丽美[1] 朱赟[1] 高孟[1] 潘海桦[2] 陈卓[1] 吴海光[1] 罗永能[1]

机构地区：[1]浙江省医学科学院病毒病研究所,杭州310013 [2]浙江普康生物技术股份有限公司,杭州310013

出　　处：《国际流行病学传染病学杂志》

基　　金：浙江省钱江人才计划项目（2012R10081）

年　　份：2013

卷　　号：40

期　　号：6

起止页码：374-378

语　　种：中文

收录情况：CAS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗），并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH，腹腔内注射免疫大鼠数次后，取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6，体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体，用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度，并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系，分别有6株属于IgGl亚型，2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化，其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl，用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量，用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒，而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗，可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法，成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。

关 键 词：肠道病毒71型 单克隆抗体 蛋白质免疫印迹  ELISA 免疫荧光检测

分 类 号：R392]