文献类型：期刊文章

作　　者：卜旺雨[1] 齐义军[1] 魏华[2] 张娟[1] 马瑾[1] 王明[1] 马远方[1]

机构地区：[1]河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室,河南开封475004 [2]河南大学淮河医院内镜室,河南开封475000

出　　处：《解剖学报》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81072039);河南省高等学校青年骨干教师资助计划(2011年)

年　　份：2013

卷　　号：44

期　　号：6

起止页码：865-868

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2011、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2013_2014、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：目的探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响。方法应用超滤法和7种沉淀方法[包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点。结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定。超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40%和4%,其他方法的蛋白回收率约为22%。丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失最多。结论丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法。

关 键 词：食管 蛋白样品制备  蛋白质组 蛋白沉淀 超滤  二维电泳

分 类 号：R446.9]